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盐析
发布时间:2022-05-25     作者:   来源:学习强国西安学习平台   分享到:

盐析

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定义:增加中性盐浓度使蛋白质、气体、未带电分子溶解度降低的现象。是蛋白质分离纯化中经常使用的方法,最常用的中性盐有硫酸铵、硫酸钠和氯化钠等。

学科:生物化学与分子生物学_方法与技术

相关名词:透析 等电点 饱和度


【延伸阅读】

盐析法是蛋白质和酶分离纯化中广泛使用的方法。

在浓度高的盐溶液中,蛋白质的溶解度会随着盐浓度的升高而降低,并以沉淀的形式析出,这就是盐析。盐析的作用是盐类使蛋白质脱去水化膜,同时压缩蛋白质分子周围的双电层,致使蛋白质分子相互聚集而沉淀。在合适的盐浓度下,不同蛋白质的溶解度不同。在混合溶液中分离几种蛋白质时,随着盐的饱和度逐渐增加,溶解度低的蛋白质首先沉淀析出;将其分离后,继续增加盐的饱和度,使第二种蛋白质沉淀析出;以此类推。上述的操作过程称为分段盐析。

盐析过程中需要注意以下几个问题:(1)盐类的选择。盐析时常用中性盐类,如硫酸铵、硫酸钠、亚硫酸钠、氯化钠等,其中最常用的是硫酸铵。硫酸铵的优点是不会引起蛋白质变性,溶解度大(在此溶解度范围内,许多蛋白质都可以分段盐析出来),同时溶解度受温度的影响小,缺点是干扰蛋白质氮含量的测定。(2)温度。一般盐析操作可以在室温下进行,但某些对热敏感的蛋白质宜在低温下进行,通常为3~4℃左右。(3)pH值。蛋白质在溶液中有两性电离现象,当其在等电点时溶解度小,容易析出,所以盐析常选择pH在蛋白质等电点进行,但在高浓度盐溶液中,蛋白质的等电点会发生变化,应加以注意。(4)蛋白质浓度。在相同盐析条件下,蛋白质浓度越大越易产生沉淀,但浓度过高易使其他杂蛋白共沉淀。因此,必须根据具体情况选择蛋白质溶液的浓度。(5)脱盐。用盐析法分离纯化蛋白质后,常需要脱盐才能获得纯品,脱盐常用透析法或凝胶过滤法。